假如一特異PCR擴(kuò)出的基因或基因片斷重組進(jìn)T載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，如何鑒定并獲得真實轉(zhuǎn)化子？

大腸桿菌是一種載體，要是因為測序的原因，獲得的全長序列要經(jīng)過測序驗證，而目前的測序技術(shù)有限，在序列的起始端準(zhǔn)確性不高，所以想要獲得準(zhǔn)確的全長序列就需要克隆到載體上。具體可以了解一下測序的原理。

可以的，因為它上面有啟動子T7/SP6（哪個我忘記了）。 但是T載體一般不用做表達(dá)載體，因為它是靠T-A連接的（T載體上含多個T，PCR產(chǎn)物含多聚A），讀碼框未必正確，所以一般是用作中間過渡的載體，后...

補充一個更重要和實際的考慮：實際測序中，可靠的測序結(jié)果往往是從引物后二三十個堿基才開始的。如果片段比較長，超過一次測序能力如七八百之外，即使雙向測序也無法獲得引物（排除非特異擴(kuò)增）或緊鄰引物處的序列時...

可以的,因為它上面有啟動子。 但是T載體一般不用做表達(dá)載體,因為它是靠T-A連接的（T載體上含多個T,PCR產(chǎn)物含多聚A）,讀碼框未必正確,所以一般是用作中間過渡的載體,后續(xù)要把這段基因切下來（你的擴(kuò)...

所以一般是用作中間過渡的載體,因為它是靠T-A連接的（T載體上含多個T,讀碼框未必正確。但是T載體一般不用做表達(dá)載體可以的,保證讀碼框正確）,因為它上面有啟動子,PCR產(chǎn)物含多聚A）,后續(xù)要把這段基因...

細(xì)菌可以在某種條件下形成感受態(tài)，然后可以接受外界基因，而動物細(xì)胞的感受態(tài)很難做，或者干脆需要注射；另外細(xì)菌的細(xì)胞可以無限繁殖，動物細(xì)胞不可以。。。 細(xì)菌轉(zhuǎn)化的局限性在于，真核生物和原核生物的表達(dá)是不同...

用鈣離子處理細(xì)胞.目的是將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程.

因為 轉(zhuǎn)化過程你沒出來好 加點 kml 再轉(zhuǎn)化 提質(zhì)后 分別切2 這樣就正確了

1、這是作為保藏的手段，不然你怎么保存你的基因？ 2、這是獲得自引物之間完整序列的必要途徑，因為測序是無法獲得待測序列起始部分和約800-1000bps之后的序列，因此需要連接到質(zhì)粒上測序，俗稱TA克...

pcDNA3.1本身就有抗性，可以用抗性培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選，然后長出來的克隆篩選，一般為三種： 1.設(shè)計擴(kuò)增外源基因片段的引物，進(jìn)行菌液PCR 2.提取質(zhì)粒，做質(zhì)粒雙酶切--Hind Ⅲ和EcoRⅠ（...