為什么pcr擴(kuò)增后不直接進(jìn)入表達(dá)載體，而要經(jīng)過(guò)克隆載體呢？關(guān)鍵原因是什么呢？謝謝

已經(jīng)得到擴(kuò)增的目的基因片段和克隆載體→對(duì)兩者分別進(jìn)行酶切（選要相同的限制性內(nèi)切酶對(duì)兩者進(jìn)行切割）→酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收→克隆載體和目的基因進(jìn)行連接（一般選用T4連接酶）→大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制...

你的問(wèn)題有點(diǎn)難以理解。 PCR怎么做要看你的目的啊，如果從基因組中擴(kuò)基因，連個(gè)鳥(niǎo)載體，當(dāng)然是直接擴(kuò)增。如果你要獲得全長(zhǎng)序列，當(dāng)然要載體，否則首尾的序列不可知。 至于“不加載體可以不加引物”就不知道你在...

那要看你用什么方式構(gòu)載體。如果用酶切連接的方式，可以直接酶切。如果用同源重組，應(yīng)該是要PCR的

普通的taq聚合酶會(huì)在PCR反應(yīng)過(guò)程中在3’末端加入一個(gè)堿基A，線性化平末端T載體的兩端分別又人工加上一個(gè)額外的T堿基，從而可與PCR克隆產(chǎn)物的A末端互補(bǔ)配對(duì)，提高了PCR產(chǎn)物連接和克隆的效率。

基因克隆上去沒(méi)有原因，克隆不上去就不好說(shuō)清楚了。 對(duì)于這種情況，直接交給專業(yè)的公司做就行了，也就千把塊錢，時(shí)間也就是1-2周。我們實(shí)驗(yàn)室是在禾船生物克隆的，非常便捷。

不用的，因?yàn)槟鉖CR的時(shí)候加的 Tag酶，在擴(kuò)增過(guò)程中它會(huì)在末端加上A... T vector就會(huì)與A結(jié)合了 你可以在下一步步驟中，選擇酶切位點(diǎn)去剪切后 再與你的目的載體連接。

你最早的目的基因、質(zhì)粒什么的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它變多，再做實(shí)驗(yàn)，去表達(dá)

一個(gè)是純化和擴(kuò)大培養(yǎng)，一個(gè)就是為了獲得想要的dna片段，弄清序列

基因克隆的步驟： 1、獲取目的基因； 2、將目的基因與載體連接； 3、重組體載入受體細(xì)胞； 4、重組體的篩選、克隆。 具體到載體連接這一步，將酶切后的載體與目的片段加入相應(yīng)的連接體系中就可以了。

PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，引物端約有幾十個(gè)堿基是測(cè)不出來(lái)的，如果你恰好關(guān)注這個(gè)位置，那么或者從另一端測(cè)通（你的產(chǎn)物不長(zhǎng)），或者克隆測(cè)序 此外，很多時(shí)候由于PCR產(chǎn)物不專一，直接測(cè)序效果不好，而克隆測(cè)序沒(méi)這個(gè)...