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進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)為什么要將目的基因連到載體上？直接對其進(jìn)行擴(kuò)增不行嗎？

2023-04-25 21:05

2個(gè)回答

2023-04-26 00:06

連到載體后擴(kuò)增有好處：載體相對于基因組或cDNA復(fù)雜度降低，擴(kuò)增出的片段純度比較高，而且循環(huán)數(shù)可以很低，如20-25循環(huán)
切忌用載體擴(kuò)增時(shí)用高循環(huán)，否則會有大量smear
引物肯定需要加的！mg2+倒可以不加——我試過！
如果沒有后續(xù)實(shí)驗(yàn)不建議連上載體，因?yàn)樘M(fèi)時(shí)費(fèi)事
有問題再聯(lián)系即可。

2023-04-25 22:52

你的問題有點(diǎn)難以理解。
PCR怎么做要看你的目的啊，如果從基因組中擴(kuò)基因，連個(gè)鳥載體，當(dāng)然是直接擴(kuò)增。如果你要獲得全長序列，當(dāng)然要載體，否則首尾的序列不可知。
至于“不加載體可以不加引物”就不知道你在說什么了。

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找公司合成目的基因后，下一步怎么連接過表達(dá)載體？直接酶切還是還要PCR擴(kuò)增？

1個(gè)回答2023-04-21 00:10

那要看你用什么方式構(gòu)載體。如果用酶切連接的方式，可以直接酶切。如果用同源重組，應(yīng)該是要PCR的

為什么pcr擴(kuò)增后不直接進(jìn)入表達(dá)載體，而要經(jīng)過克隆載體呢？關(guān)鍵原因是什么呢？謝謝

2個(gè)回答2022-11-30 11:55

這個(gè)問題的主要原因是PCR產(chǎn)物不容易被酶切?？寺〉絋載體后就可以很容易的進(jìn)行酶切。這樣做起方便。

是否目的基因在PCR擴(kuò)增時(shí)不用在引物中加入酶切位點(diǎn)，就可與pGEM-T載體連接？為什么？

1個(gè)回答2022-12-24 12:18