質(zhì)粒雙酶切后怎么會(huì)這個(gè)樣子

酶切前,質(zhì)粒電泳圖一般是三條條帶,并認(rèn)為這三條帶從上到下一次是線性、開環(huán)、超螺旋.其實(shí)可能會(huì)比這條帶更多些,可以認(rèn)為是中間復(fù)合體狀態(tài).
酶切后,因?yàn)槌菪隣顟B(tài)的質(zhì)粒被切成線性,所以條帶會(huì)有一條條帶.如果是雙酶切,或是質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)比較多的話,會(huì)有兩條或更多條帶.
重組質(zhì)粒是把載體質(zhì)粒酶切開，連接上PCR片段，然后轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)后提質(zhì)粒獲得的，這一系列過程中都無法檢測(cè)目的基因是否連接成功了，是否轉(zhuǎn)化成功了，只有對(duì)轉(zhuǎn)化后的菌再次提質(zhì)粒、酶切檢測(cè)或PCR檢測(cè)才能確定前邊的步驟是否成功。
測(cè)序是更準(zhǔn)確的方法，一般不用而已。