pcr技術(shù)電子書(shū)

隨機(jī)引物PCR(arbitrarily
primed
PCR，AP-PCR)是指在對(duì)模板順序一無(wú)所知的情況下，通過(guò)隨意設(shè)計(jì)或選擇一個(gè)非特異性引物，在PCR反應(yīng)體系中，首先在不嚴(yán)格條件下使引物與模板DNA中許多序列通過(guò)錯(cuò)配而復(fù)性。在理論上，并不一定要求整個(gè)引物都與模板復(fù)性，而只要引物的一部分特別是3'端有3-4個(gè)以上堿基與模板互補(bǔ)復(fù)性，既可使引物延伸。
理論上，一旦在兩條單鏈上相距一定距離且有反向復(fù)性引物存在，則可在Taq
DNA聚合酶的作用下進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增，經(jīng)1至數(shù)輪不嚴(yán)格條件下的PCR循環(huán)后，再于嚴(yán)格條件下進(jìn)行擴(kuò)增。經(jīng)DNA測(cè)序凝膠電泳分離后，即可得到DNA指紋圖，通過(guò)對(duì)不同來(lái)源基因指紋圖之間的比較，即可反映出待分析基因組的特征。
RNA是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈，主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息傳遞過(guò)程中的橋梁。tRNA的功能是攜帶符合要求的氨基酸，以mRNA為模板，合成蛋白質(zhì)。
了解不？

根據(jù)簡(jiǎn)寫(xiě)的命名原則，
RT PCR指反轉(zhuǎn)錄PCR，
qRT PCR指實(shí)時(shí)熒光定量PCR，
real time PCR指定量PCR，不是反轉(zhuǎn)錄PCR

一樓的~real-time PCR不就是RT-PCR嗎？！實(shí)時(shí)定量PCR

中心法則.DNA→RNA【轉(zhuǎn)錄,逆轉(zhuǎn)錄】 DNA自我復(fù)制
外顯子,內(nèi)含子
運(yùn)載體上
體內(nèi)基因治療,體外基因治療
PCR；原理：半保留復(fù)制 條件：模板連,熱穩(wěn)定酶,堿基對(duì),
結(jié)果：獲得目的基因

什么酶呢？最后酶切組的電泳條帶是彌散，是只有質(zhì)粒條帶沒(méi)有酶切產(chǎn)物條帶，還是干脆就是空白？

如果是彌散，最有可能的是所用的酶的反應(yīng)條件要求比較嚴(yán)格，因?yàn)檎莆詹划?dāng)而產(chǎn)生了星號(hào)活性，導(dǎo)致把質(zhì)粒切碎了。建議查一下所用酶的酶切條件。

如果是有質(zhì)粒條帶而沒(méi)有短片段條帶，也就是說(shuō)沒(méi)切開(kāi)了?？赡苊盖形稽c(diǎn)發(fā)生了突變，也可能是酶失活了。

如果是空白...我也不知道怎么回事兒了...再重復(fù)一次吧。

如果認(rèn)為之前的步驟都沒(méi)什么問(wèn)題，不如直接送測(cè)序。比酶切檢驗(yàn)還要精確呢。

祝實(shí)驗(yàn)順利。

博凌科為-為你解答：Takara LA Taq酶，體系同說(shuō)明書(shū)。反應(yīng)程序是：（要求引物Tm值在70度左右，但上下只能浮動(dòng)2度。Primer 5計(jì)算） No. of Cycles Temperature (℃) Duration 1 94 3 min 5 94 30 sec 72 3 min 5 94 30 sec 70 30 sec 72 3 min 25 94 30 sec 68 30 sec 72 3 min 1 72 5 min 1 4 10 min

PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。

這個(gè)情況我也碰到過(guò)。當(dāng)時(shí)是我一側(cè)引物序列5`端搞錯(cuò)，但P出來(lái)的產(chǎn)物和原來(lái)在一個(gè)位置，而且亮度也很強(qiáng)！

熒光定量PCR目的：在PCR反應(yīng)中，無(wú)論是定性還是定量分析，分析的都是PCR的終產(chǎn)物。但是有時(shí)候想知道的卻是未經(jīng)PCR放大之前的起始模板量，RT-PCR應(yīng)用而生。