pcr技術(shù)電子書(shū)
RT-PCR是什么
隨機(jī)引物PCR(arbitrarily
primed
PCR,AP-PCR)是指在對(duì)模板順序一無(wú)所知的情況下,通過(guò)隨意設(shè)計(jì)或選擇一個(gè)非特異性引物,在PCR反應(yīng)體系中,首先在不嚴(yán)格條件下使引物與模板DNA中許多序列通過(guò)錯(cuò)配而復(fù)性。在理論上,并不一定要求整個(gè)引物都與模板復(fù)性,而只要引物的一部分特別是3'端有3-4個(gè)以上堿基與模板互補(bǔ)復(fù)性,既可使引物延伸。
理論上,一旦在兩條單鏈上相距一定距離且有反向復(fù)性引物存在,則可在Taq
DNA聚合酶的作用下進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增,經(jīng)1至數(shù)輪不嚴(yán)格條件下的PCR循環(huán)后,再于嚴(yán)格條件下進(jìn)行擴(kuò)增。經(jīng)DNA測(cè)序凝膠電泳分離后,即可得到DNA指紋圖,通過(guò)對(duì)不同來(lái)源基因指紋圖之間的比較,即可反映出待分析基因組的特征。
RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息傳遞過(guò)程中的橋梁。tRNA的功能是攜帶符合要求的氨基酸,以mRNA為模板,合成蛋白質(zhì)。
了解不?
primed
PCR,AP-PCR)是指在對(duì)模板順序一無(wú)所知的情況下,通過(guò)隨意設(shè)計(jì)或選擇一個(gè)非特異性引物,在PCR反應(yīng)體系中,首先在不嚴(yán)格條件下使引物與模板DNA中許多序列通過(guò)錯(cuò)配而復(fù)性。在理論上,并不一定要求整個(gè)引物都與模板復(fù)性,而只要引物的一部分特別是3'端有3-4個(gè)以上堿基與模板互補(bǔ)復(fù)性,既可使引物延伸。
理論上,一旦在兩條單鏈上相距一定距離且有反向復(fù)性引物存在,則可在Taq
DNA聚合酶的作用下進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增,經(jīng)1至數(shù)輪不嚴(yán)格條件下的PCR循環(huán)后,再于嚴(yán)格條件下進(jìn)行擴(kuò)增。經(jīng)DNA測(cè)序凝膠電泳分離后,即可得到DNA指紋圖,通過(guò)對(duì)不同來(lái)源基因指紋圖之間的比較,即可反映出待分析基因組的特征。
RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息傳遞過(guò)程中的橋梁。tRNA的功能是攜帶符合要求的氨基酸,以mRNA為模板,合成蛋白質(zhì)。
了解不?
RT-PCR,QRT-PCR,real-timePCR之間什么區(qū)別
根據(jù)簡(jiǎn)寫(xiě)的命名原則,
RT PCR指反轉(zhuǎn)錄PCR,
qRT PCR指實(shí)時(shí)熒光定量PCR,
real time PCR指定量PCR,不是反轉(zhuǎn)錄PCR
RT PCR指反轉(zhuǎn)錄PCR,
qRT PCR指實(shí)時(shí)熒光定量PCR,
real time PCR指定量PCR,不是反轉(zhuǎn)錄PCR
RT-PCR與時(shí)時(shí)PCR的原理及引物有什么區(qū)別?
一樓的~real-time PCR不就是RT-PCR嗎?!實(shí)時(shí)定量PCR
pcr中心法則
中心法則.DNA→RNA【轉(zhuǎn)錄,逆轉(zhuǎn)錄】 DNA自我復(fù)制
外顯子,內(nèi)含子
運(yùn)載體上
體內(nèi)基因治療,體外基因治療
PCR;原理:半保留復(fù)制 條件:模板連,熱穩(wěn)定酶,堿基對(duì),
結(jié)果:獲得目的基因
外顯子,內(nèi)含子
運(yùn)載體上
體內(nèi)基因治療,體外基因治療
PCR;原理:半保留復(fù)制 條件:模板連,熱穩(wěn)定酶,堿基對(duì),
結(jié)果:獲得目的基因
酶切后PCR一條帶都沒(méi)有 但原質(zhì)粒PCR有條帶 為什么
什么酶呢?最后酶切組的電泳條帶是彌散,是只有質(zhì)粒條帶沒(méi)有酶切產(chǎn)物條帶,還是干脆就是空白?
如果是彌散,最有可能的是所用的酶的反應(yīng)條件要求比較嚴(yán)格,因?yàn)檎莆詹划?dāng)而產(chǎn)生了星號(hào)活性,導(dǎo)致把質(zhì)粒切碎了。建議查一下所用酶的酶切條件。
如果是有質(zhì)粒條帶而沒(méi)有短片段條帶,也就是說(shuō)沒(méi)切開(kāi)了??赡苊盖形稽c(diǎn)發(fā)生了突變,也可能是酶失活了。
如果是空白...我也不知道怎么回事兒了...再重復(fù)一次吧。
如果認(rèn)為之前的步驟都沒(méi)什么問(wèn)題,不如直接送測(cè)序。比酶切檢驗(yàn)還要精確呢。
祝實(shí)驗(yàn)順利。
如果是彌散,最有可能的是所用的酶的反應(yīng)條件要求比較嚴(yán)格,因?yàn)檎莆詹划?dāng)而產(chǎn)生了星號(hào)活性,導(dǎo)致把質(zhì)粒切碎了。建議查一下所用酶的酶切條件。
如果是有質(zhì)粒條帶而沒(méi)有短片段條帶,也就是說(shuō)沒(méi)切開(kāi)了??赡苊盖形稽c(diǎn)發(fā)生了突變,也可能是酶失活了。
如果是空白...我也不知道怎么回事兒了...再重復(fù)一次吧。
如果認(rèn)為之前的步驟都沒(méi)什么問(wèn)題,不如直接送測(cè)序。比酶切檢驗(yàn)還要精確呢。
祝實(shí)驗(yàn)順利。
大片段的RT-PCR
博凌科為-為你解答:Takara LA Taq酶,體系同說(shuō)明書(shū)。反應(yīng)程序是:(要求引物Tm值在70度左右,但上下只能浮動(dòng)2度。Primer 5計(jì)算) No. of Cycles Temperature (℃) Duration 1 94 3 min 5 94 30 sec 72 3 min 5 94 30 sec 70 30 sec 72 3 min 25 94 30 sec 68 30 sec 72 3 min 1 72 5 min 1 4 10 min
pcr的反應(yīng)條件是什么
PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。
為什么pcr可以,但是測(cè)序沒(méi)有結(jié)果
這個(gè)情況我也碰到過(guò)。當(dāng)時(shí)是我一側(cè)引物序列5`端搞錯(cuò),但P出來(lái)的產(chǎn)物和原來(lái)在一個(gè)位置,而且亮度也很強(qiáng)!
RT-PCR的原理是什么?有何用途?
熒光定量PCR目的:在PCR反應(yīng)中,無(wú)論是定性還是定量分析,分析的都是PCR的終產(chǎn)物。但是有時(shí)候想知道的卻是未經(jīng)PCR放大之前的起始模板量,RT-PCR應(yīng)用而生。
PCR條帶彌散是什么原因
通常是非特異擴(kuò)增過(guò)多引起,提高退火溫度試試
PCR產(chǎn)物放置過(guò)久考慮產(chǎn)物降解;如果是PCR后及時(shí)上樣,考慮引物特異性較差或者模板不純(包括降解以及摻有別的DNA序列)
如果用PCR產(chǎn)物做模板的話,量太大也會(huì)有這個(gè)現(xiàn)象。
膠沒(méi)煮好也會(huì)這樣
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