凡人修仙傳t×t全文下載

接二連三
一個接著一個，接連不斷。
[拼音]
jiē èr lián sān
[出處]
清·曹雪芹《紅樓夢》第九十九回：“賈母還要將李紈等挪過來；為著元妃薨后；家中事情接二連三；也無暇及此?！?br/>[例句]
參賽的隊員接二連三地沖過了終點。
[近義]
連續(xù)不斷 連三并四 源源不斷 接踵而至 ...
[反義]
后繼無人 斷斷續(xù)續(xù) 后繼有人

T載體又稱T-vector。聚合酶鏈反應產(chǎn)物的克隆運載體，線性化后兩側(cè)3′端各多出一個脫氧胸苷酸(T)。由于PCR產(chǎn)物兩側(cè)3′端通常含單個脫氧腺苷酸(A)，與T載體之間的A-T互補性可提高PCR產(chǎn)物克隆的效率。

T載體是一種克隆載體，也就是用于在受體細胞中進行目的基因擴增的載體，它不能大量表達。多用于克隆PCR產(chǎn)物，一般用一些常見的載體改造成的，一般的DNA聚合酶沒有3'-5'核酸外切酶活性，即酶的校正活性，在PCR產(chǎn)物3'末端以非模板依靠方式加上一個腺苷酸殘基（A），這樣PCR產(chǎn)物的3'腺苷酸可和T-載體的3'胸腺嘧啶 互補，T-載體系統(tǒng)進行有效連接的基礎正是這種堿基配對作用。相反，有校正活性的聚合酶將移去這個3' 突出端，產(chǎn)生平端PCR產(chǎn)物，這種產(chǎn)物不能直接用T-載體系統(tǒng)進行克隆。
假如想要一PCR擴增基因的產(chǎn)物大量表達，常見的方法是先將PCR產(chǎn)物連入T載體擴增（所用T載體需事先設計好酶切位點），再用相應酶切下目的片段，然后連入以同樣酶切處理后的表達載體大量表達蛋白質(zhì)。

t載體就是T-DNA，是一類可以重組到受體生物染色體上的載體，通常被應用于植物的基因重組過程中。

1確認連接體系沒有問題.2 確認設計引物的時候兩邊酶切位點的堿基和保護堿基沒有問題.3 考慮PCR產(chǎn)物回收產(chǎn)物濃度提高一點.連T一般很容易的,我也做的單酶切連接,祝成功啦.

一段線性雙鏈DNA載體，載體的兩端3‘末端各有一個額外的T。因為大部分Taq聚合酶會在PCR產(chǎn)物3’末端添加一個額外的A，所以使用T載體可以比較方便且高效（相對于平末端）進行PCR產(chǎn)物的連接反應，以方便克隆的構(gòu)建或檢測。

應該是分子克隆用的載體，使用前是雙鏈線性片段，上面有必要的測序或表達元件，兩頭是黏末端，各在3'有一個游離的t（故名t載體）。因為pcr實驗中用的聚合酶大部分都是taq和taq的同類酶，會在pcr產(chǎn)物的3'末端自動加一個a，這樣pcr產(chǎn)物純化之后無需酶切就可以與t載體連接，連接結(jié)果為帶有目的片段的環(huán)狀質(zhì)粒載體。之后轉(zhuǎn)化挑克隆，進行表達和測序。

我做過幾個克隆，沒用過T載體，直接將酶切后純化的產(chǎn)物進行連接，照樣可以連接成功，基本上都會有10-50個克隆長出來。我用的是Sal I和Nde I這兩個酶切位點，似乎這兩個都是平端的哦。

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測序結(jié)果不一致，這個直接咨詢給你測序的公司就行了。如果測序結(jié)果可信度高，這個相似性就太低了。
測序完成后是否有終止密碼子就要看你測序的這一段是否包含了終止密碼子了，這個需要你自己分析。

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