把目的基因連接到質(zhì)粒上構(gòu)建重組質(zhì)粒時該如何選擇限制性內(nèi)切酶？引物如何設(shè)計？

重組時選擇你的目的基因上沒有，而質(zhì)粒的多克隆位點上有的酶切位點，一般重組質(zhì)粒需要兩個酶，所以你要選擇兩個酶切位點，注意盡量避免使用切出平末端的酶。重組引物設(shè)計時首先你要確定你選擇的兩個酶在的酶切位點在質(zhì)粒的多克隆位點上的排列順序，這個不能錯，不然序列就會接反。一般設(shè)計重組引物的時候，在上游引物5’端前面加上載體多克隆位點排列在前面的酶切位點序列，在下游引物5‘端前面則加上后面的一個酶切位點，酶切位點加好后，注意5’端還需要加上保護(hù)堿基，這個具體你可以去查下內(nèi)切酶的說明書。然后你要注意，根據(jù)你的載體需要，是否要在引物上帶上啟動子和終止子。