基因工程中 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合的成功率

2022-08-25 15:14

1個回答
是這樣的,一般我們用兩個檢測標(biāo)準(zhǔn)
第一個是標(biāo)記基因,用來檢測是否運(yùn)載體進(jìn)入到受體細(xì)胞里面。例子:運(yùn)載體里面帶有一個抵抗抗生素的基因。那么把所有受體細(xì)胞(比如,大腸桿菌)撒在培養(yǎng)皿上之后,培養(yǎng)皿中有抗生素,只有當(dāng)運(yùn)載體進(jìn)入細(xì)胞之后才能抵抗抗生素,所以只有這些細(xì)胞才能存活。
再者,要選擇成功加入目的基因的運(yùn)載體。在上面的例子中,所有存活的細(xì)菌中不是所有都含有目的基因。這時(shí)候我們用一個選擇法。典型的例子是,運(yùn)載體的酶切點(diǎn)在其中一個lacZ基因里面,如果目的基因加入進(jìn)去,那么lacZ基因就不完整,所以不能表達(dá),反之,則能表達(dá)。我們在培養(yǎng)皿中放一種叫X-gal的成分,這種成分跟lacZ產(chǎn)生的酶反應(yīng)生成藍(lán)色的菌落。所以如果目的基因沒有加入到運(yùn)載體里面,那么產(chǎn)生的菌落是藍(lán)色的;反之,如果目的基因加入進(jìn)去,lacZ基因無法表達(dá),X-gal無法分解,所以菌落就是白色的
這樣,就可以選擇想要的目的基因了
這個成功結(jié)合率沒有固定的,要因?qū)嶒?yàn)而定
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