在我做的載體與片段連接中,在轉(zhuǎn)化后,酶切后質(zhì)粒是不長(zhǎng)的,而重組后的長(zhǎng)了,可是,最后結(jié)果卻是。

2022-10-24 08:19

結(jié)果是,片段根本沒有連進(jìn)去,連進(jìn)去的卻是一個(gè)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于我的目的片段的堿基序列,這是為什么呢?(我的目的片段極?。?/div>
1個(gè)回答
說明你PCR擴(kuò)增之后回收的條帶不對(duì)
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連接轉(zhuǎn)化后提質(zhì)粒做酶切,可以切出帶,做質(zhì)粒PCR卻P不出來,為什么
1個(gè)回答2023-05-22 05:30
都有可能 你可以多做幾個(gè)對(duì)照,如空載體轉(zhuǎn)化、空細(xì)胞涂板等等,幫助縮問題小范圍 你可以詢問實(shí)驗(yàn)室其他人員,看看酶是否有問題,感受態(tài)是否有問題,抗生素是否有問題,等等 按你給的線索,菌落很少,很有可能是切...
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為什么質(zhì)粒雙酶切后顯得更大了?
1個(gè)回答2022-10-31 22:29
線性化的跑得最慢。 質(zhì)粒酶切后,和沒有酶切的對(duì)照相比。應(yīng)該會(huì)多出一條帶,這條帶應(yīng)該是跑得最慢的,也就是顯得比原來的更大。酶切的不徹底的話,原來的那幾條帶也可能存在wjswj(站內(nèi)聯(lián)系TA)酶切之前你看...
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質(zhì)粒雙酶切后怎么會(huì)這個(gè)樣子
1個(gè)回答2022-12-27 10:50
酶切前,質(zhì)粒電泳圖一般是三條條帶,并認(rèn)為這三條帶從上到下一次是線性、開環(huán)、超螺旋.其實(shí)可能會(huì)比這條帶更多些,可以認(rèn)為是中間復(fù)合體狀態(tài). 酶切后,因?yàn)槌菪隣顟B(tài)的質(zhì)粒被切成線性,所以條帶會(huì)有一條條帶.如...
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質(zhì)粒載體和重組質(zhì)粒的區(qū)別
2個(gè)回答2023-02-22 03:20
我們所說的質(zhì)粒是指細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中的小型環(huán)狀DNA分子,其作用是控制細(xì)菌的次級(jí)代謝 ,而載體是指在基因工程中用以協(xié)載目的基因的小型環(huán)狀DNA分子,載體一般是經(jīng)過改造的質(zhì)粒,還可以是動(dòng)植物病毒的DNA,豐暉...
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雙酶切連接后轉(zhuǎn)化,長(zhǎng)出了菌落,但提質(zhì)粒跑電泳,分子量比目的質(zhì)粒大很多,為什么
1個(gè)回答2023-01-04 20:31
可能是兩個(gè)載體互連了,你酶切了跑膠分析一下長(zhǎng)度就清楚了. 原因基本跑不了載體互連、多個(gè)片段互連,或者根本沒提出來,而是把細(xì)菌基因組給弄出來了,這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程,仔細(xì)看一下膠上有沒有條...
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雙酶切連接后轉(zhuǎn)化,長(zhǎng)出了菌落,但提質(zhì)粒跑電泳,分子量比目的質(zhì)粒大很多,為什么
2個(gè)回答2022-09-27 14:25
可能是兩個(gè)載體互連了,你酶切了跑膠分析一下長(zhǎng)度就清楚了。 原因基本跑不了載體互連、多個(gè)片段互連,或者根本沒提出來,而是把細(xì)菌基因組給弄出來了,這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程,仔細(xì)看一下膠上有沒有條帶什...
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雙酶切質(zhì)粒后電泳 的問題
2個(gè)回答2022-08-31 16:57
很顯然是質(zhì)粒發(fā)生了自連啦。切開的2個(gè)質(zhì)粒連起來了,因此相當(dāng)于2個(gè)質(zhì)粒的大小。你需采用磷酸化避免自連發(fā)生。
基因表達(dá)載體和重組質(zhì)粒的區(qū)別
1個(gè)回答2022-09-24 04:14
很大的區(qū)別。
一個(gè)質(zhì)粒和一個(gè)目的基因,上面都有兩種酶的切割位點(diǎn),為什么用一種酶切后,再連接,有三種連接產(chǎn)物,而...
2個(gè)回答2022-09-19 16:46
連接產(chǎn)物有:質(zhì)粒和質(zhì)粒連,目的基因和目的基因連,質(zhì)粒和目的基因連. 至于你說的用兩種酶切的產(chǎn)物,需要具體看酶的位置關(guān)系再作判斷,情況就多了
為什么我的目的基因連接克隆載體轉(zhuǎn)化、提質(zhì)粒后,酶切鑒定正確,而質(zhì)粒PCR和菌液PCR鑒定都不正確呢?著急
2個(gè)回答2023-01-28 07:00
因?yàn)?轉(zhuǎn)化過程你沒出來好 加點(diǎn) kml 再轉(zhuǎn)化 提質(zhì)后 分別切2 這樣就正確了
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